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產品規(guī)格：1 mg、50 μL（2 mM）

產品參數 

外觀：可溶于DMSO的橙紅色固體（F3005） 

貯存條件：-20℃ 避光保存 

保質期：見外包裝 

CAS號：121714-22-5

分子式：C51H50Cll2N2O23 

分子量：1129.9 

分子結構圖：

產品介紹 

     Fluo-3, AM ester是一種可以穿透細胞膜的熒光染料。 Fluo-3, AM ester 進入細胞后可以被細胞內源性酯酶剪切形成Fluo-3，從而被滯留在細胞內。Fluo-3可以和鈣離子結合，結合鈣離子后可以產生較強的熒光，最大激發(fā)波長為506 nm， 最大發(fā)射波長為526 nm。

實驗步驟 

1. 用無水DMSO溶解 Fluo-3, AM配制成2 - 5 mM的儲存液， 或將溶液形式的Fluo-3, AM儲存液取出于室溫回溫。

2. 用PBS或HBSS等緩沖液稀釋Fluo-3, AM 溶液，制備4 μM 的Fluo-3, AM 工作液。 

注：為了避免過度加載造成細胞毒性，建議在取得有效結果的基礎上盡量使用最低探針濃度。

3.（可選）如果Fluo-3進入細胞的效果不好，可向Fluo-3, AM/DMSO 溶液中加入適量20% Pluronic F127溶液，防止 Fluo-3, AM在緩沖液中聚合并促進其進入細胞，Pluronic F127終濃度控制在0.04-0.05%。

注：(1) 20%(w/v)的Pluronic F-127 DMSO母液配制：100 mg Pluronic F-127中加入0.5 mL DMSO，配制成20% (w/v) 的 DMSO 母液。溶解過程需要在40 - 50℃加熱20 - 30 min。 溶液室溫保存，不要冷藏。如果有結晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用。

     (2) Pluronic F127可降低Fluo-3, AM的穩(wěn)定性，因此只建議在配制工作液時加入，不建議將其加入儲存液長期保存。

4. 取出預培養(yǎng)的細胞，除去培養(yǎng)基，使用PBS或HBSS溶液洗滌細胞3次。 

5. 將Fluo-3, AM 工作液加入細胞，在37℃培養(yǎng)10-60 min。 

注：如果首次實驗不能確定孵育溫度和時間，建議先嘗試37℃孵育20分鐘，觀察熒光效果。如果細胞死亡較多，則適當縮短時間或降低溫度；如果熒光強度太弱，則適當延長時間。

6. 去除Fluo-3, AM 工作液，用PBS或HBSS等緩沖液洗滌細胞3次，然后用PBS或HBSS等緩沖液重懸細胞，制成1×105 cells/mL的溶液。 

7. 37℃下培養(yǎng)10 min，以確保 AM 體在細胞內的完全去酯化作用。 

8. 進行熒光鈣離子檢測（激發(fā)波長506 nm，發(fā)射波長526 nm ）。

注意事項 

     1. 如果使用含有血清的培養(yǎng)基，血清中的酯酶會分解AM 體，從而降低Fluo-3, AM 進入細胞的效果。另外，含有酚紅的培養(yǎng)基會使本底值略微偏高，所以加工作液之前，應盡量去除培養(yǎng)基殘留。

     2. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

     3. 本Fluo-3, AM容易吸潮，從冰箱取出后，請確認在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑極微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底。 

4. Fluo-3, AM遇水極易分解，如果不能一次用完，建議將儲液小量分裝保存。